El kit de TriniCLOT Fibrinogen
está diseñado para la determinación cuantitativa del fibrinógeno en plasma.
RESUMEN:
La mayoría de los métodos para
determinar la concentración de fibrinógeno asumen que la trombina convertirá
cuantitativamente el fibrinógeno a fibrina. La estimación de la concentración
en base al peso o contenido proteico del coágulo de fibrina formado puede estar
sujeta a importantes errores debido a la presencia de inhibidores que provocarán
la formación de coágulos pequeños o ausencia de coágulos. La plasmina también
puede producir lisis significativa del coágulo formado antes de que pueda ser
completada la determinación final de fibrinógeno. Se han descrito
procedimientos alternos basados en la precipitación con sulfato de amonio5,6
pero estos no correlacionan con los tiempos de coagulación de la trombina
cuando los niveles de fibrinógeno están por debajo de 100 mg/dl (1.0 g/L)
PREPARACION DEL REACTIVO:
Reconstituya el TriniCAL
Fibrinogen con 1,0 ml de agua destilada o desionizada. Tape denuevo el vial y
déjelo reposar hasta que esté completamente disuelto. Inviértalo suavemente
para mezclarlo. NO LO AGITE.
Reconstituya el reactivo de
trombina con 6,0 ml de agua destilada o desionizada. Tape de nuevo vial y
déjelo reposar hasta que esté completamente disuelto. Inviértalo
periódicamente. NO LO AGITE. El tampón
de imidazol se suministra como un líquido y no requiere preparación antes de su
uso.
ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
Se deben seguir las precauciones
normales establecidas para el manejo de reactivos en el laboratorio. Deseche
los residuos de acuerdo con la legislación local, nacional y regional.
El TriniCAL Fibrinogen es un
MATERIAL QUE PODRÍA SUPONER UN RIESGO BIOLÓGICO.
Métodos de prueba aprobados
indican que los materiales originales de los que deriva este product muestran
resultados negativos de AgHBs, así como anticuerpos contra el VHC, el VIH-1 y
el VIH-2. Sin embargo, como no hay ningún método de prueba que pueda garantizar
por completo que no existan agentes infecciosos, este producto deberá manejarse
cumpliendo las mismas precauciones de seguridad que cuando se manipula material
potencialmente infeccioso. El reactivo
de trombina es NOCIVO. Produce daños si entra en contacto con la piel o si se
ingiere. Produce irritación en los ojos, en el sistema respiratorio y en la
piel. En caso de contacto con los ojos, lávelos inmediatamente con abundante
agua y consulte a un médico. Lleve ropa de protección adecuada. La ausencia de
vacío al abrir un vial de reactivo de trombina o TriniCAL Fibrinogen, o la
incapacidad para obtener valores reproducibles son posibles signos de deterioro
del producto.
El tampón de imidazol contiene
acida de sodio, que es NOCIVA. Produce daños si entra en contacto con la piel o
si se ingiere. El contacto con ácidos libera un gas muy tóxico. Mantenga el
contenedor herméticamente cerrado. Lleve ropa y guantes protectores adecuados.
MATERIAL CON RIESGO BIOLÓGICO POTENCIAL. La acida de sodio puede reaccionar con
piezas de plomo y cobre, dando como resultado acidas metálicas altamente
explosivas. Evite la acumulación de acidas. Deseche el tampón de imidazol si
hay signos de crecimiento microbiano.
Método de BBL Fibrometer:
Curva de calibración y prueba del
plasma del paciente:
1. Reconstituya el reactivo de
trombina y manténgalo a temperatura ambiente (18-25°C) durante la prueba.
2. Añada 0,2 ml (200 µl) de la
muestra de plasma diluida a una copa de Fibrometer.
3. Incube durante 1–3 minutos a
37°C. (No más de 5 minutos.)
4. Después de la incubación,
extraiga rápidamente 0,1 ml (100 µl) del reactivo de trombina en la copa de
Fibrometer y, al mismo tiempo, active el cronómetro.
5. Anote los resultados del
tiempo de coagulación en segundos.
6. Extrapole la concentración a
partir de la curva de calibración.
Las sondas deben lavarse y
secarse entre una prueba y otra para evitar el arrastre de proteínas
plasmáticas activadas. Para una limpieza eficaz, las sondas de Fibrometer deben
sumergirse en agua y frotarse CON FUERZA después de cada determinación. No
basta con secarlas con papel secante.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
La dilución más baja recomendada
de la prueba es 1:3. No se puede emplear plasma sin diluir, ya que los
inhibidores y las sustancias que interfieren pueden afectar a la precisión de
los resultados.
El tiempo de medición más corto
para el instrumento KC 1/KC 4 es de unos 4,5 segundos. Cuando obtenga un tiempo
de coagulación de 4,5 segundos, vuelva a ejecutar la muestra con una dilución
diferente.
Los resultados no se ven
excesivamente afectados por niveles terapéuticos de heparina habituales (hasta
3,0 USP U/ml) detectados en pacientes anticoagulados. Se ha indicado que los
productos de degradación de la fibrin (PDF) pueden inhibir la acción de la
trombina sobre el fibrinógeno y la polimerización de la fibrina. Los PDF tienen
un efecto mínimo en un ensayo de fibrinógeno con niveles normales de
fibrinógeno. En concentraciones de fibrinógeno por debajo de 150 mg/dl (1,5
g/L), una concentración de PDF superior a 100 g/ml puede inhibir en mayor
medida el ensayo de Clauss.
RESULTADOS:
MUESTRA 1: 1 MINUTO
MUESTRA 2: 1 MINUTO, 7 SEGUNDOS.
ESTA PRACTICA NOS SRVIO PARA PODER SABER EL TIEMPO EN EL QUE SE TARDA EN COAGULAR EL TEJIDO SANGUINEO GRACIAS A LA CASCADA DE CAGULACION
APLICACIÓN:
Es un equipo de prueba que se
utiliza en la determinación del tiempo de tromboplastina parcial activada (TTPA)
y que consiste de un reactivo fosfolípido con activador en partículas y un
reactivo de cloruro de calcio.
RESUMEN Y EXPLICACIÓN DE LA
PRUEBA:
La prueba de tiempo de
tromboplastina parcial activada es un procedimiento de screening universalmente
aceptado que se utiliza para detectar anomalías en el sistema intrínseco de coagulación.
Puede utilizarse también en pruebas de factores para detectar deficiencias de
los factores II, V, VIII, IX, X, XI y XII, pero es insensible al factor
plaquetario. Además puede utilizarse para detectar el anticoagulante de Lupus y
se recomienda para controlar la terapia con heparina ya que es sensible a la
presencia de esta. La prueba de TTPA no se recomienda para controlar la
terapia con anticoagulantes orales ni es
sensible a la disfunción plaquetaria. Estas condiciones se controlan mejor
mediante la prueba de tiempo de protrombina o una prueba de tiempo de sangrado,
respectivamente.
El reactivo de TriniCLOT aptt s
se mezcla con plasma del paciente para proporcionar una activación uniforme óptima
de la muestra.
Después de la activación a 37°c
durante 5 minutos se inicia la reacción añadiendo CaCi2 TriniCLOT aPTT S. se
mide en segundos el tiempo necesario para la formación de coagulación.
MATERIALES:
1. Micropipeta
con puntas desechables 0.1 mL
2. Plasmas
control
3. Plasma de
referencia y plasma deficiente en factor (para pruebas de factores)
4. Instrumentación
para coagulación
5. Micropipetas
6. Plasmas
de control triniCHECK
7. Plasma de
referencia triniCAL
8. Plasmas
deficientes en factores
PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA:
1. Calentar
previamente a 37°c un volumen suficiente de reactivo TriniCLOT aPTT S y CaCi2 TriniCLOT
aPPT S.
2. Etiquetar
un tubo de ensayo para cada muestra (paciente y control) a analizar.
3. Pipetear
0.1 mL de muestra o control al tubo adecuado; a continuación, pipetear 0,1 mL
de Reactivo TriniCLOT aptt s a cada tubo.
4. Después
de la activación pipetear inmediatamente a cada tubo 0.1 mL de CaCi2 TriniCLOT
aPTT S previamente calentado e iniciar simultáneamente el cronometraje para la
detección de la coagulación mediante un método de detección conveniente. Anotar
el tiempo, en segundos, transcurrido hasta que se detecta coagulación.
NOTAS DEL PROCEDIMIENTO Y PRECAUCIONES:
1. Al fin de
obtener un funcionamiento adecuado del reactivo, debe utilizarse CaCi2
TriniCLOT aPPT S en combinación con Reactivo TriniCLOT aPPT S. No sustituir el
CaCi2 TriniCLOT aPPT S por otros reactivos de cloruro de calcio. Los reactivos
deben de corresponder específicamente con el lote de equipo para asegurar un
funcionamiento óptimo. No mezclar los reactivos de diferentes lotes de quipo.
2. Se
recomienda efectuar las determinaciones por duplicado para los métodos
manuales.
3. Es
importante utilizar material de vidrio (o de plástico) limpio. La superficie
del contenedor y el área superficial pueden alterar la activación de las
muestras. Se recomienda seguir una misma técnica en todos los procedimientos de
coagulación.
4. La
siguiente secuencia es adecuada para realizar una prueba de tiempo de
tromboplastina parcial activada; para las determinaciones automáticas seguir
las instrucciones específicas que acompañan al instrumento utilizado
RESULTADOS:
El tiempo obtenido (en segundos)
es el tiempo de tromboplastina parcial
activada del paciente.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:
Aunque con TriniCLOT aPTT S
pueden utilizarse casi todos los métodos manuales y automáticos para la detección
de la coagulación, los diversos métodos pueden detectar puntos finales
ligeramente distintos. Deben tomarse oportunas precauciones al comparar
resultados obtenidos con métodos distintos.
El plasma de algunos pacientes
con alto contenido en fibrinógeno muestra en aumento de turbiedad tras añadirle
cloruro de calcio, lo que puede originar, antes de la formación real de coagulo,
un registro del tiempo de coagulación al usarse un sistema óptico de detección.
No obstante, el tiempo real de coagulación no queda afectado por ello, lo cual
permite la obtención de un ttpa terapéuticamente apropiado usando un método no óptico. Los
plasmas cuyo resultado de punto final de
ttpa óptico es inferior a 22 segundos, con valores ampliamente discrepantes o incongruentes
con el curso de la terapia del paciente, deberán ser identificados y
controlados nuevamente con un sistema de detección de punto final no óptico.
RESULTADOS:
MUESTRA 1
12 SEGUNDOS
MUESTRA 2
16 SEGUNDOS
